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    SPE固相萃取-液相色譜串聯質譜法測定動物源食品中的氯黴素

    更新時間:2021-07-12       點擊次數:3606

    SPE固相萃取-液相色譜串聯質譜法測定動物源食品中的氯黴素

    前言

    氯黴素曾廣泛用於治療各種敏感菌感染,後因對造血係統有嚴重不良反應,故對其臨床應用現已做出嚴格控製。氯黴素可用於傷寒、副傷寒和立克次體病等及敏感菌所致的嚴重感染。氯黴素在腦脊液中濃度較高,也常用於治療其他藥物療效較差的腦膜炎患者。由於氯黴素可引起嚴重的毒副作用,所以建立一種高效、快速的定量流程及檢測方法尤為重要。本文使用SPE1000全自動固相萃取係統對牛肉中的氯黴素進行固相萃取富集,用高效液相色譜質譜儀進行檢測。

    本文參考農業部781號公告-2-2006 動物源食品中氯黴素殘留量的測定 液相色譜—串聯質譜法SPE1000全自動固相萃取係統,測定氯黴素的回收效果,實驗證明,氯黴素回收率在90.2%~99.5%之間,重現性RSD3.5%,回收率和重現性良好,說明SPE1000全自動固相萃取係統可靠、穩定,適用於動物源食品中的氯黴素樣品前處理。

    關鍵詞:氯黴素,SPE1000全自動固相萃取係統,液相色譜串聯質譜, 

    1實驗過程

    1.1儀器與試劑

    SPE1000全自動固相萃取係統(豆奶APP官网公司);

    SCIEX 4500 液相色譜串聯質譜SCIEX);

    氯黴素,100 mg/L,壇墨質檢;

    氯黴素D5,100 mg/L,壇墨質檢;

    氯化鈉(分析純);

    正己烷(色譜純);

    乙酸乙酯(色譜純);

    乙腈(色譜純);

    C18固相萃取柱,(1000 mg/6 mL豆奶APP官网);

    實驗用水:超純水。

    1.2標準工作液的配製

    1 mL氯黴素標品於10 mL容量瓶中,甲醇定容,配置成濃度為10 μg/mL的標準儲備液。

    100 μL 的氯黴素標準儲備液,用甲醇定容到10 mL,配製成0.1 μg/mL標準工作液。

    1 mL氯黴素D5標品於10 mL容量瓶中,甲醇定容,配置成濃度為10 μg/mL的標準儲備液。

    100 μL 的氯黴素D5標準儲備液,用甲醇定容到10 mL,配製成0.1 μg/mL標準工作液。

    1.3試驗方法

    1.3.1樣品準備

    取均質後的樣品5g置於50mL離心管中,加入內標200μL,氯黴素標液200μL,加入乙腈5mL,4%氯化鈉5mL,渦旋2min,4000rad/min離心10min,取上清液至另一個50mL離心管中,重複提取一次,合並提取液。提取液中加入正己烷5mL,渦旋2min,2000rad/min離心10min,棄去上層清液,重複一次,加入水飽和乙酸乙酯5mL,渦旋1min,2000rad/min離心10min,將上層液轉移到15mL離心管中,重複提取一次,合並提取液氮吹至幹,用水:乙腈(95:55mL溶解,備用。

    同時做樣品空白,加入內標200μL,剩下同樣品處理 。

    1.3.2 固相萃取及濃縮

    按照圖1所示的方法進行SPE1000方法編輯,並加載方法到相應通道,進行樣品的固相萃取。收集洗脫液到收集瓶中,氮吹濃縮至幹,用1 mL流動相定容。

     

    1   氯黴素SPE富集方法

    1.3.3 UPLC-MS測定牛肉中氯黴素

    液相條件:

    色譜柱:C18,5 μm,4.6 mm*100mm; 

        速:0.2 mL/min ;

    進樣量:5 μL;

    流動相:乙腈:水=40:60;

    MS條件:

    氣簾氣~40       CAD~9      TEM~150      GS1~40  噴霧電壓-4500V

    1  氯黴素母離子/子離子(定量例子152.0)

    名稱

    母離子/子離子

    CE

    DP

    CXP

    氯黴素

    321.0/152.0

    -23

    -70

    -8

    321.0/256.7

    -16

    -70

    -8

    氯黴素D5

    326.1/156.9

    -23

    -70

    -30

    2試驗結果

    2.1牛肉氯黴素色譜圖

    2.1.1牛肉中氯黴素標品色譜圖

    2為取200 μL氯黴素標準工作液200μL氯黴素內標工作液,流動相定容到1.0 mL檢測,氯黴素標品出峰色譜圖,出峰時間為 1.50min。

     

     

     

     

     

     

     

     

    2  氯黴素標品出峰色譜圖

    2.1.2牛肉中氯黴素樣品色譜圖

     

     

     

     

     

     

     

     

    3氯黴素加標樣品出峰色譜圖,出峰時間為1.50min,4為空白樣品色譜圖。

    3  氯黴素加標樣品出峰色譜圖

     

     

    4   空白樣品色譜圖

    2.2 UPLC-MS測定牛肉中氯黴素回收率

    液質測定牛肉中氯黴素回收率計算結果如下表,萃取富集後的回收率在之間90.2%~99.5%,重現性RSD3.5%。

    2  牛肉中氯黴素的加標回收率(加標4 ug/kg

    名稱

    回收率(%

    平均值

    (%)

    RSD

    %

    1

    2

    3

    4

    5

    6

    氯黴素

    99.5

    96.0

    98.5

    95.3

    90.2

    94.3

    95.6

    3.5

     

    3結果與討論

    SPE1000全自動固相萃取係統淨化的樣品,其回收率在90.2%~99.5%,重現性為3.5%,準確度與平行性良好且自動化效率高,可應用於此類樣品的前處理方法中。

    參考文獻

    農業部781號公告-2-2006 動物源食品中氯黴素殘留量的測定 液相色譜—串聯質譜法

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